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動物源性食品中多獸藥殘留的快速分離及 LC-MS/MS 分析
來源: | 作者:pro3c304b | 發布時間: 101天前 | 250 次瀏覽 | 分享到:
獸藥殘留是指獸藥的原形化合物或其代謝物在動物細胞、組織、器官或其他可食性產品(如奶、蛋)的蓄積和存儲。獸藥殘留既包括原藥,也包括藥物在動物體內的代謝產物。長期食用獸藥殘留過高的食物會引起人體的多種急慢性中毒作用,誘導耐藥菌株產生,引起變態反應以及致癌、致畸和致突變作用。這不僅與公眾的健康息息相關,也直接關系到產業界的經濟利益、國際經濟貿易和國家形象。本方法建立了動物源性食品中多獸藥殘留的高效液相-串聯質譜檢測方法。該方法適用于動物源性食品中 β-受體激動劑(瘦肉精)、氯霉素、磺胺類藥物、喹諾酮類藥物殘留量的檢測。

動物源性食品中多獸藥殘留的快速分離及 LC-MS/MS 分析

(適用于 β-受體激動劑、氯霉素、磺胺類、喹諾酮類藥物殘留量的測定)

前言

獸藥殘留是指獸藥的原形化合物或其代謝物在動物細胞、組織、器官或其他可食性產品(如奶、蛋)的蓄積和存儲。獸藥殘留既包括原藥,也包括藥物在動物體內的代謝產物。長期食用獸藥殘留過高的食物會引起人體的多種急慢性中毒作用,誘導耐藥菌株產生,引起變態反應以及致癌、致畸和致突變作用。這不僅與公眾的健康息息相關,也直接關系到產業界的經濟利益、國際經濟貿易和國家形象。本方法建立了動物源性食品中多獸藥殘留的高效液相-串聯質譜檢測方法。該方法適用于動物源性食品中 β-受體激動劑(瘦肉精)、氯霉素、磺胺類藥物、喹諾酮類藥物殘留量的檢測。

1.      樣品前處理方法

1.1  樣品提取

a(根據國家標準 GB/T 22286-2008GB/T 22338-2008,動物源性食品中β-受體激動劑(瘦肉精)、氯霉素的檢測需要加入 β-葡萄糖醛酸酶進行水解) 稱取(0.2±0.002g 攪碎的試樣于 2 mL 離心管中,加入 200 μL IMCSzyme? 快速水解緩沖液,充分混勻,加入5 μL IMCSzyme? β-葡萄糖醛酸酶,輕度渦旋混勻;37 水解 2 小時。水解結束后,在待測樣品中加入內標工作液,用 Benchmark D2400 組織均質儀混勻,在均質好的樣品中加入 1 mL 乙腈,在渦旋振蕩器上振蕩 1~2 分鐘,在轉速 14000~18000 r/min 離心 20 min,分離上清液至新的離心管中, 60 下氮氣吹干。將吹干的殘渣用 700 μL 0.2%甲酸/水溶液溶解,作為待凈化液(注:用pH試紙檢測待凈化液的 pH 值, pH < 4)。

b(若只檢測磺胺類或喹諾酮類藥物則不需要進行酶水解)稱取 0.2±0.002g 攪碎的試樣于 2 mL 離心管中,加入 200 μL 水,加入內標工作液,用 Benchmark D2400 組織均質儀混勻,在均質好的樣品中加入 1 mL 乙腈,在渦旋振蕩器上振蕩 1~2 分鐘,在轉速 14000~18000 r/min 離心 20 min ,分離上清液至新的離心管中, 60 下氮氣吹干。將吹干的殘渣用 700 μL 0.2% 甲酸/水溶液溶解,作為待凈化液。

1.2  凈化方法

1)將實驗室通用 1 mL 移液槍刻度調至 1 mL ,連接 MicroSepTM DPX 多獸殘凈化柱,依次用 750 μL 甲醇,750 μL 2% 甲酸/水溶液平衡,即反復吸打 100% 甲醇 2 次,完全打出后再反復吸打 2% 甲酸/水溶液 2 次。

2)將待凈化液上柱,將平衡后的柱子浸入待凈化液中,上下吸取、排放樣品溶液 4 次。

3)依次用 700 μL 0.2% 甲酸/水溶液,700 μL 20% 甲醇水溶液及 700 μL 正己烷洗滌柱子,即依次吸打各溶液 2 次。

4)用新鮮配制 1500 μL 30% 氨水甲醇溶液進行洗脫,即吸打溶液 3 次。

5)洗脫液在 60 下氮氣吹干,殘余物用 0.1% 甲酸-甲醇水溶液(甲醇:水 = 595200 μL 溶解,渦旋混勻,過濾或離心后,供高效液相色譜-串聯質譜儀(LC-MS/MS)測定。

2.      檢測方法

2.1 色譜條件

色譜儀: Acquity 超高效液相色譜儀美國 Waters 公司)

色譜柱: Waters ACQUITY UPLC BEH C18 50 mm × 2.1 mm, 1.7 μm

流動相:A0.1 %V/V甲酸水溶液

B0.1 %V/V甲酸乙腈溶液

柱溫:35 ℃

流速:0.2 mL/min

進樣量:5 μL

流動相梯度條件:見表1

1 流動相梯度條件條件

時間(min

流速(mL/min)

A/%

B/%

0

0.2

96

4

3

0.2

92

8

7

0.2

60

40

7.5

0.2

5

95

8.5

0.2

5

95

9.6

0.2

96

4

2.2 質譜條件

質譜儀:XEVO TQ-S串聯質譜儀美國Waters公司)

離子源:電噴霧離子源(ESI

掃描方式:正離子模式(氯霉素為負離子掃描)

采集方式:多反應監測(MRM

離子源溫度:150

干燥氣溫度:450
        
毛細管電壓:3 kV

干燥氣流速:600 L/h

其他質譜參數見表2

2 多獸殘的質譜參數

化合物

母離子

子離子

錐孔電壓(V)

碰撞能量(V)

RT

磺胺醋酰
sulfacetaminde

215

156*

30

12

2.54

108

30

18

磺胺吡啶
sulfapyridine

250

156*

30

16

4.05

108

30

25

磺胺甲噁唑
Sulfamethoxazole

254

156*

30

16

6.18

92

30

26

磺胺甲基嘧啶
sulfamerazine

265

156*

30

15

4.38

92

30

28

磺胺二甲異噁唑
sulfisoxazole

268

156*

30

13

6.58

92

30

28

苯酰磺胺
sulfabenzamide

277

156*

30

15

6.91

108

30

22

磺胺二甲基嘧啶
sulfamethazine

279

186*

30

16

5.24

92

30

28

磺胺甲氧噠嗪
sulfamethoxypyridazine

281

156*

30

15

5.43

92

30

30

磺胺間甲氧嘧啶
sulfamonomethoxine

281

156*

30

22

5.87

92

30

35

磺胺氯噠嗪
sulfachloropyridazine

285.1

156*

30

15

5.99

92

30

28

磺胺喹沙啉
Sulfaquinoxaline

301.1

156*

30

16

7.13

92

30

30

磺胺間二甲氧嘧啶
sulfadimethoxine

311.1

156*

30

20

7.13

92

30

32

諾氟沙星
norfloxacin

320.1

276.1*

32

20

5.26

233

32

25

環丙沙星
ciprofloxacin

332.1

314.1*

32

22

5.40

288.1

32

18

洛美沙星
lomefloxacin

352.1

265.1*

31

22

5.44

308.1

31

18

達氟沙星
danofloxacin

358.2

314.1*

32

20

5.55

96

32

25

恩諾沙星
enrofloxacin

360.2

316.1*

32

22

5.56

245

32

20

氧氟沙星
ofloxacin

362.2

261.13*

48

26

5.32

205.02

48

38

沙拉沙星
sarafloxacin

386.2

342.1*

37

18

6.09

299.1

37

27

氯霉素
chloramphenicol

321

152.1*

30

18

6.77

257.1

30

12

西瑪特羅
cimaterol

220.3

160.1*

25

15

2.51

143

30

25

特布他林
terbutaline

226.3

152.2*

30

15

2.43

107.2

30

30

沙丁胺醇
salbutamol

240.3

148.2*

25

20

2.55

166.2

25

12

萊克多巴胺
ractompamine

302.3

164.2*

25

15

5.51

107.2

25

30

溴布特羅
brombuterol

367.1

293.3*

30

18

6.28

214.1

30

30

溴代克侖特羅
brom-chlorbuterol

321.25

247.16*

10

16

6.14

168.2

10

28

克侖特羅
clenbuterol

277.24

168.2*

6

26

5.96

203.1

6

16

班布特羅
Bambuterol

368.31

294.27*

2

18

6.47

72.1

2

28

馬布特羅
mabuterol

311.3

237.2*

30

15

6.60

217.2

30

25

恩諾沙星-D5
enrofloxacin-D5

365.23

245.17

16

26

5.61

特布他林-D9
terbutaline-D9

235.3

153

30

15

2.38

克侖特羅-D9
clenbuterol-D9

286.4

204.1

6

16

5.94

*定量離子

3 多獸藥液相色譜-串聯質譜質量色譜圖


1 多獸藥混合標準溶液液相色譜-串聯質譜質量色譜圖

1:特布他林 2:沙丁胺醇 3:西瑪特羅 4:磺胺醋酰 5:磺胺吡啶 6:磺胺甲基嘧啶 7:磺胺二甲基嘧啶 8:諾氟沙星 9:氧氟沙星 10:環丙沙星 11:洛美沙星 12:磺胺甲氧噠嗪 13:萊克多巴胺 14:達氟沙星 15:恩諾沙星 16:磺胺間甲氧嘧啶 17:沙拉沙星 18:磺胺氯噠嗪 19:克侖特羅 20:溴代克侖特羅21:磺胺甲噁唑 22:溴布特羅 23:班布特羅 24:馬布特羅 25:磺胺二甲異噁唑 26:氯霉素 27:苯酰磺胺 28:磺胺間二甲氧嘧啶 29:磺胺喹沙啉

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