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IMCS-C018 尿液中阿密曲替林和環苯扎林代謝物的酶水解效率評估
來源: | 作者:pro3c304b | 發布時間: 64天前 | 226 次瀏覽 | 分享到:
阿密曲替林是一種廣譜的三環抗抑郁藥物,環苯扎林是一種三環骨骼肌松弛劑,其在代謝中均形成季銨葡萄糖苷酸復合物。為了能夠精確的定量這些代謝物,需對復合物進行水解。本研究比較了四種β-葡萄糖醛酸酶對這兩種復合物的水解效率。

概述

阿密曲替林是一種廣譜的三環抗抑郁藥物,環苯扎林是一種三環骨骼肌松弛劑,其在代謝中均形成季銨葡萄糖苷酸復合物。為了能夠精確的定量這些代謝物,需對復合物進行水解。本研究比較了四種β-葡萄糖醛酸酶對這兩種復合物的水解效率。

材料與方法

1.      藥物標準品購于Cerilliant CorporationIMCSzyme?購于Integrated Micro-Chromatography Systems, LLC。鮑魚β-葡萄糖醛酸酶購于Campbell Science,帽貝及大蝸牛β-葡萄糖醛酸酶購于Sigma-Aldrich

2.      樣本準備:200 μL尿液+100 μL水解復合物(水解緩沖液,酶及內標)。于60進行水解。IMCSzyme?水解時間為30分鐘,其余三種酶水解60分鐘。

3.      水解后經RP-S槍頭(DPX LLC)萃取,并用LC-MS/MS分析。

結果

阿密曲替林與環苯扎林葡萄糖苷酸復合物能夠被IMCSzyme?完全水解,其余三種酶只能部分水解,且水解時間更長(圖1)。圖2be)顯示了使用了其余三種酶進行水解時,出現若干沒有水解的葡萄糖苷酸復合物的峰,而IMCSzyme?水解后無葡萄糖苷酸復合物峰(圖2 cf)。

結論

與三種商業化的β-葡萄糖醛酸酶相比,IMCSzyme?對阿密曲替林與環苯扎林葡萄糖苷酸復合物的水解效率顯著提高,且水解時間更短。其余的酶效率低可能由于酶溶液不純,有雜質且對底物的親和力不同。而IMCSzyme?是一種生物工程改良的β-葡萄糖醛酸酶,其高純度高活性的特點使得催化效率更高。


1. LC-MS/MS阿密曲替林(a)與環苯扎林(b)的檢測濃度。紅色代表水解前分析物濃度。其余四種顏色分別代表用IMCSzyme?,大蝸牛,帽貝及鮑魚水解后分析物濃度。


2. 阿密曲替林(a-c)與環苯扎林(d-f)葡萄糖苷酸水解圖譜。a,d未加酶,b,e加有鮑魚β-葡萄糖醛酸酶,c,f為加有IMCSzyme?

此項研究為IMCS總結于技術研究報告“Variations in enzymatic hydrolysis efficiencies for amitriptyline and cyclobenzaprine in urine.”(由Kaylee R. Mastrianni, L. Andrew Lee, William E. Brewer, Nagarju Dongari, Michael Barna and Stephen L. Morgan發表于2016Journal of Analytical Toxicology)。
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